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蛋白质羰基含量检测试剂盒说明书

发布时间:2021-06-18

蛋白质羰基含量检测试剂盒注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品内容:

提取液:液体25mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂0.1g×3 支,4℃保存。(使用前根据样品数,每支加1mL水溶解,每支为10 个样品用量)

试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:根据测定样品量,将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。(自备)

试剂六:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

产品说明:

蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志,其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小,是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。

羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙,在370nm 处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器:

天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿、蒸馏水, 无水乙醇和乙酸乙酯。

蛋白质羰基含量检测试剂盒操作步骤:

一、样品处理

组织样品:称取约0.1g 组织样品,加入1mL提取液,充分匀浆后于4℃5000rpm 离心10min,取上清,加入0.1mL试剂一,室温放置10min4℃12000rpm离心10min,取上清,然后取20μL测定蛋白含量,剩余的作为待测样品。

三、计算公式
1、按蛋白浓度计算:
蛋白质羰基含量(μmol/mg prot)=(OD370测定管OD370空白管÷(ε×d)×V÷(Cpr×V样品)
                               =(OD370测定管OD370空白管÷4.4÷Cpr;
2、按样本鲜重计算:
蛋白质羰基含量(μmol/g鲜重)=(OD370测定管OD370空白管÷(ε×d)×V÷(W×V样品÷V提取)
                             =(OD370测定管OD370空白管÷4÷W
ε:蛋白质羰基消光系数,22mL?μmol-1?cm-1d:比色皿光径,1cm;V:加入试剂六体积,1mL;V样品:加入样本体积,0.2mL;V提取:加入提取液及试剂一体积,1.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。W:样品质量,g。
注意事项:
1.试剂一使用之前根据要测定的样品数现配,配置好后4℃保存,若变为黑色,则不能使用。
2.试剂二见光易分解,反应需严格避光。