正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

S-UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。

测定原理：

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：甲苯 2mL×1 瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：粉剂×1 瓶，临用前加入9mL蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂 4℃保存；

试剂三：液体 19mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四 A 液：液体×1 支，4℃保存；

试剂四 B 液：液体×1 瓶，4℃保存；临用前将 A 液倒入 B 液中混合，待用；用不完的试剂 4℃保存一周；

试剂五：液体 2mL×1 瓶，4℃保存；

测定步骤：

1、培养

测定管 对照管

风干土样(g) 0.05 0.05

试剂一（μL） 20 20

振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置 15min

试剂二（μL） 90

蒸馏水（μL） 90

试剂三（μL） 190 190

混匀，放入 37℃水浴培养 24h 后，10000g 25℃离心 10min，取上清液。

2、将培养结束的上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）。

3、测氨量（在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂）

测定管 对照管

稀释后的上清液（μL） 80 80

试剂四（μL） 15 15

试剂五（μL） 15 15

充分混匀，室温放置 20min

蒸馏水（μL） 90 90

混匀，于578nm处，蒸馏水调零，读吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

脲酶活力计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y=0.0915x +0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。

单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

脲酶活力（μg/d/g 土样）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷W÷T 

=656×(ΔA -0.0373)

10：稀释倍数；T：反应时间，1d； V 反总：反应体系总体积：0.3mL；W：样本质量，0.05g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y=0.04575x+0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。

单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

脲酶活力（μg/d /g 土样）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷W÷T 

=1312×(ΔA -0.0373)

10：稀释倍数；T：反应时间，1d； V 反总：反应体系总体积：0.3mL；W：样本质量，0.05g。