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土壤脲酶(solid-urease,s-ue)测定试剂盒说明书

发布时间:2020-05-26

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

S-UE能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。

测定原理:

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:甲苯 2mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:粉剂×1 瓶,临用前加入9mL蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂 4℃保存;

试剂三:液体 19mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四 A 液:液体×1 支,4℃保存;

试剂四 B 液:液体×1 瓶,4℃保存;临用前将 A 液倒入 B 液中混合,待用;用不完的试剂 4℃保存一周;

试剂五:液体 2mL×1 瓶,4℃保存;

测定步骤:

1、培养

测定管 对照管

风干土样(g) 0.05 0.05

试剂一(μL) 20 20

振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min

试剂二(μL) 90

蒸馏水(μL) 90

试剂三(μL) 190 190

混匀,放入 37℃水浴培养 24h 后,10000g 25℃离心 10min,取上清液。

2、将培养结束的上清液稀释10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL蒸馏水)。

3、测氨量(在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂)

测定管 对照管

稀释后的上清液(μL) 80 80

试剂四(μL) 15 15

试剂五(μL) 15 15

充分混匀,室温放置 20min

蒸馏水(μL) 90 90

混匀,于578nm处,蒸馏水调零,读吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

脲酶活力计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y=0.0915x +0.0373;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值A。

单位的定义:每天每g土样中产生1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

脲酶活力(μg/d/g 土样)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷W÷T 

=656×(ΔA -0.0373)

10:稀释倍数;T:反应时间,1d; V 反总:反应体系总体积:0.3mL;W:样本质量,0.05g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y=0.04575x+0.0373;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值A。

单位的定义:每天每g土样中产生1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

脲酶活力(μg/d /g 土样)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷W÷T 

=1312×(ΔA -0.0373)

10:稀释倍数;T:反应时间,1d; V 反总:反应体系总体积:0.3mL;W:样本质量,0.05g。