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影响ELISA实验的部分因素

发布时间:2019-07-24

                                  影响ELISA实验的部分因素

 

     目前,病毒性疾病的诊断主要依赖对其抗原或是抗体的检测,国内使用zui多的就是酶联免疫吸附法实验,酶免实验灵敏度较高。但是如何保证结果的,结合实验人员实际操作,对影响酶免检测结果的因素粗略的分析一下。

一 试剂盒的选择

   时机和质量直接影响到结果的准确性。目前国内试剂盒与国外的质量相差不大,94年起国家对体外诊断试剂统一实行批批检测。我们的经验是根据同行对试剂盒的使用满意度,部分根据卫生部检测中心对参加室间质评实验室的试剂盒使用情况综合评价。

通常试剂盒的效期是根据酶结合物的稳定性确定。这是试剂的核心组份,要防止反复的剧烈温差变化,取用时的原则“即取即用”减少酶的失活,或者直接采购小包装的试剂盒。

二标本

标本质量的好坏直接影响到结果的准确性,目前实验室zui常用的标本为血清。首先家养一定要在血块完全收缩分离后进行,否则纤维蛋白容易吸附孔底导致假阳性结果。溶血对酶免实验结果也会有较大影响。在标本采集时用玻璃试管采集,有报道塑料试管存放,进行乙肝两对半检测。结果4H后明显偏低,这是因为聚乙烯有吸附抗原或抗体蛋白,但是目前大多数的实验室免疫项目并非每天都做,比如乙肝两对半抗HCV等。

三 加样稀释

   我国大多数抗HCV等试验标本只有10μl  10%的误差。以2μl/L HBsAg质控血清进行试验,加量分别为50μl 45μl,其余条件一致,测定结果吸光度分别为0.405±0.026和0.288±0.047.因此,移液器的准确性需要进行校验。zui好使用进口移液器,同时移液器,移液器要与吸头连接紧密。

   关于稀释剂,媒介和物的家主,国内也有部分使用滴瓶滴加,但是加液两不够准确会造成稀释倍数的差距。建议使用移液器加注。

四 育温

通常在37度的水浴箱中完成,水浴箱的温度指示为水的温度,不过要值得注意的是不能将反应板放在试管架上,要是反应板飘浮在水面上稍高出试管架,箱盖不能时常打开,保持箱内的温度恒定,相反的情况容易假阳性结果。

五洗版

   zui好选择手动洗版,手工法洗版每洗一次在吸水纸上拍干一般都能保证洗版效果。

六显色

   国内酶联免疫试剂盒的色源底一般分为AB两种液体。由于两种液体不稳定,使用保存不当容易产生颜色,发现有颜色必须丢弃,显色时加入A液后加B液。过程按照说明书严格执行。否则随着时间的延长吸光度会下降出现假阳性发生。