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DNA合成速率

2016-08-01

DNA合成速率

 

    一个细胞群体的直方图除依赖于各时相的百分比和CV值,还与S时相DNA合成速率有关。图就表示这个影响。图中的群体是个指数生长群体,三个图的时相百分比一样,所不同的就是DNA合成速率:a在晚S时相合成速率有最大值,b的合成速率在S时相内是常数,c的合成速率在S时相内有时大有时小,合成速率曲线有些“振荡”。如何在实验中确定合成速率曲线?我们举出一个方法,其所要求的条件是:假定群体是非同步生长的,S时相内的细胞都是增殖的,DNA染料的染色特异性与碱基的构成无关。在上述假定条件下,有一个称为RC的方法。RCRadioactiv-ity per Cell)即每个细胞的放射性的简称,因为要测量平均每个细胞的放射性,故有此名称,图即是此方法示意图。a表示在一个DNA直方图的S时相内开一系列窗口,此一群体事先用【3H-TdR脉冲标记30分钟,对每个窗口内的S时相细胞进行分选,原则上说窗口分的愈细愈好。此处我们假定是10个,被分选的细胞落在硝酸纤维片上,细胞数量由流式细胞计设定,经三氯乙酸清洗后,将纤维片放入液闪瓶中测定其放射性。由于已知细胞总数,故可的平均每个细胞的放射性,此数值与其DNA合成速率成正比,将各窗口的RC值画出,得b图的曲线。图b纵轴是平均每个细胞的放射性,也可看成是合成速率,横轴是S时相的10个窗口,以道数表示。从图上不难看出,在S时相内,DNA合成速率不是常数,大约在中、晚S时相合成速率最高。

     图上曲线起始和终了部分误差较大,一般都会十分偏低,因为第1个窗口分选出来的细胞中会有一些G1期细胞,第10个窗口中会有G2M期细胞,这些细胞都无放射性,结果得出错误的RC值。本方法的困难还在于整个分选过程应在较短时间内完成,因而对仪器操作人员提出较高的要求,分选应十分熟练、准确。最后本方法的缺点是合成曲线是合成速率与S时相窗口间的关系曲线而不是与时间的关系曲线,有人为此做了改进,可得出与时间的关系。