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发酵过程中无机磷的利用

2016-07-04

 

发酵过程中无机磷的利用

 

目的要求

1、了解发酵过程中无机磷的作用。

2、掌握定磷法的原理和操作技术。

实验原理

    酵母能使蔗糖和葡萄糖发酵嫦产生乙醇和二氧化碳。此过程于无机磷将唐磷酸化有关。

本实验利用无机磷与钼酸形成的磷酸噢诶之化合物能被还原剂a-1.2.4-氨基酸磺酸钠还原成钼兰的原理来测定发酵前后反应混合物中无机磷的含量,用以观察发酵过程中无机磷的消耗。

试剂和器材

1、试剂

   蔗糖;5%三氯乙酸;3mol/L硫酸和2.5%钼酸铵等体积混合液。

  磷酸盐溶液;称取Na2HPO4·12H2O 120.7gKH2PO4 20g溶解于蒸馏水中,定容至1000mL,在冰箱中贮存备用。临用前稀释适当倍数。

   标准磷酸盐溶液:将磷酸氢二钾(KH2PO4)在110℃烘箱中烘干2h,冷却后准确称取0.1098g,用蒸馏水溶解,定容到1000mL,成为每毫升溶液含25ug无机磷的标准磷酸盐溶液。

   A-1,2,4-氨基萘酚磺酸溶液:将0.25g a-1,2,4=氨基萘酚磺酸,15g亚硫酸氢钠及0.5g亚硫酸钠溶于100mL蒸馏水中。使用前稀释3倍。

2、材料

新鲜啤酒酵母

3、器材

 试管1.5cm×15cm(×15);移液管0.2mL(×2),0.5mL(×2),1mL(×2),5mL(×3);锥形瓶50mL(×1);水浴锅;研钵;滤纸;分光光度计。

操作方法

1、制作标准曲线

    取9支试管编号后,加入试剂;绘制标准曲线:以A600为纵坐标,含磷量为横坐标,在坐标纸上绘制标准曲线。

2、酵母发酵

    称取24g新鲜酵母和1g蔗糖,放入研钵内仔细研碎。加入5mL蒸馏水和5mL磷酸盐溶液研磨均匀。将匀浆转移至50mL锥形瓶中并立即取出0.5mL均匀的悬浮液,加入到已盛有3.5mL三氯乙酸溶液的试管中,摇匀作为式样1,将锥形瓶放入37℃恒温水浴中,每隔30min取出0.5mL悬浮液,立即加入已盛有3.5mL三氯乙酸溶液的试管中,摇匀。共取3次,作为试样234。将每个试样过滤后,得无蛋白滤液备用。

3、无机磷的测定

    取5只干燥洁净的试管,编号后加入各种溶液;从标准曲线上查处各试样的无机磷含量,以试样1的无机磷含量为100%,计算酵母发酵306090min后消耗无机磷的相对百分数。

注意事项

    在本实验的预备实验中,应首先摸索酵母的用量及磷酸盐的稀释倍数。使光吸收值在适当的范围内。